液相色谱仪相关介绍 一、液相色谱仪的主要类型液固吸附色谱 1.1分离原理 液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的，其固定相是固体吸附剂。 1.2固定相 ;吸附色谱固定相可以分为极性和非极性两大类。 1.3流动相 ;流动相要求： 1.3.1选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性 1.3.2选用的溶剂应有高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。 1.3.3选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如果使用紫外吸收检测器，就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂;若使用示差折光检测器，就不能用梯度洗脱。 1.3.4选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。 1.3.5选用的溶剂应具有低的黏度和适当低的沸点。 1.3.6应尽量避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全 1.4应用 液固色谱是以表面吸附性能力为依据的，所以它常用于分离极性不同低的化合物，也能分离那些具有相同极性基团，但数量不同的样品。 液液分配色谱 1.1分离原理 ;分配色谱法的原理与液液萃取相同，都是分配定律。 1.2固定相 ;分配色谱固定相由两部分组成，一部分是惰性载体，另一部分是涂渍在惰性载体上的固定液。 1.3流动相 ;分内色谱中，要求流动相尽可能不与固定液互溶 1.4应用 ;既能分离极性化合物，又能分离非极性化合物。由于不同极性键合固定相的出现，分离的选择性可得到很好的控制。 键合相色谱 1.1分离原理 1.1.1正键合相色谱分离远离：使用的是极性键和固定性，溶质在此类固定相上的分离机理属于分配色谱.1.1.2反键合相色谱分离原理：使用的是极性较小的键合固定相，其分离机理可用疏溶剂作用理论来解释。 1.2固定相 ;按极性大小可分为非极性、弱极性、极性化学键合固定相三种。 1.3流动相 1.3.1正键合相色谱中，采用和反相液液分配色谱相似的流动相，流动相的主体成分为己烷或庚烷。 1.3.2反相键合相色谱中，流动相采用和反相液液分配色谱相似的流动相，主题为水。 1.4应用 1.4.1正键合相色谱法的应用：多用于分离各类极性化合物如染料、炸药、多巴胺、氨基酸等;1.4.2反键合相色谱法的应用：由于操作简单，稳定性和重复性好，该方法已成为一种通用型液相色谱分析方法。在生物化学、医药研究、食品分析和环境污染分析等多个领域有了很大的应用和发展。 凝胶色谱 凝胶色谱又称分子排阻色谱，它是按照分子尺寸大小顺序进行分离的一种色谱方法。凝胶色谱法的固定相凝胶是一种多孔性的聚合材料，有一定的形状和稳定性。根据所用流动相的不同，凝胶色谱法可以分为两类：即用水溶剂做流动相的凝胶过滤色谱法（GFC）与用有机溶剂如四氢呋喃做流动相的凝胶渗透色谱法（GPC）. 二、液相色谱操作步骤：
1）首先对流动相进行过滤，根据需要选择不同的滤膜，一般为有机系和水系，常用的孔径为0.20um和0.45um。
2）对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3）正常情况下，仪器首先用甲醇冲洗10-20分钟，然后再进入测试用流动相（如流动相为缓冲试剂，则要二次重蒸水冲洗10-20分钟，直至色谱柱中有机相冲净为止） 。
4）一般情况下，流动相冲洗20-30分钟后，仪器方可稳定，zui重要的是仪器基线走后，方可进样测试。
5）同时进两针标样，将其结果相比较，其结果的比值在0.98-1.02之间后，就可以正式进行样品的测试了。
6）样品测试结束后，就要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。如流动相为缓冲试剂，同样也要用重蒸水清洗10-20分钟，方可用有机相进行保护，否则，有损色谱柱。
7）关机时，先关计算机，再关液相色谱。
8）填写登记本，由负责人签字。
三、液相色谱注意事项：
1）流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2）柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要让液体过柱子。
3）所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4）压力不能太大，不要超过150kgf/cm2 .
5）.因为缓冲试剂遇有机溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。
|
